看看双特异性抗体的高效蛋白a亲和层析

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双特异性抗体的高效蛋白a亲和层析

在早期筛选中使用蛋白a亲和层析纯化双特异性抗体(BsAb)的单步下游工艺已被开发出来，目的是替代现有的三步工艺从片段（如单个重链和轻链对）中分离BsAb单体。

由于BsAb具有广泛的应用而引起了越来越多的关注，但它们都具有双重特异性。为了找到相关主要生物疗法BsAb，通常需要多步纯化工艺（包括抗体纯化填料捕获步骤以及一个或两个额外纯化步骤），以去除与BsAb单体密切相关且源自目标BsAb的不良杂质。

本研究中使用的BsAb为三链BsAb异源二聚体，具有两个不同的重链(HC)和相同的轻链 (LC)。不同的链由不同的载体表达，并与细胞胞质溶胶中的最终BsAb分子结合。另一项挑战是处理为进一步临床研究而生产的大量候选BsAb。

Celgene设计了一种一步法替代原来的方法，对每种候选抗体分配几周时间，包括三步纯化：采用MabSelect SuRe的蛋白A捕获步骤、采用Capto adhere的多峰层析中间步骤和采用Capto Phenyl ImpRes的疏水层析精纯步骤，以上所有填料均来自Cytiva。

最后选择MabSelect PrismA蛋白a亲和层析填料用于捕获步骤。通过pH梯度洗脱（pH 值 5 至 3.5），可在捕获步骤中尽早除去大部分片段，无需额外纯化步骤。使用所述单步工艺高效纯化目标 BsAb，实现高回收率和高纯度。

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